告别单点作战，伦敦玛丽女王大学MyeloNova团队构建双特异性嵌合抗原受体T细胞

告别单点作战，伦敦玛丽女王大学MyeloNova团队构建双特异性嵌合抗原受体T细胞

在急性髓系白血病（Acute Myeloid Leukemia，AML）精准免疫治疗领域，肿瘤抗原异质性、靶点选择以及治疗安全性始终是制约CAR-T技术进一步发展的关键难题。不同AML患者之间，甚至同一患者体内不同白血病细胞群体之间，都存在着明显的抗原表达差异。传统单靶点CAR-T只能识别单一肿瘤相关抗原，一旦部分白血病细胞出现靶抗原低表达或缺失，CAR-T细胞便难以有效识别和清除残余肿瘤细胞，进而导致抗原逃逸和疾病复发。与此同时，部分AML候选靶点同样存在于正常髓系细胞甚至造血干/祖细胞上，使得CAR-T在杀伤肿瘤的同时，也可能误伤正常的造血系统。

针对传统单靶点CAR-T覆盖不足的技术瓶颈，伦敦玛丽女王大学MyeloNova团队依托前期获得的LILRB3/LILRB4 Two-in-one双特异性抗体识别模块，进一步构建了能够同时识别LILRB3和LILRB4的双特异性CAR-T细胞。这一设计将双靶点识别理念从抗体药物延伸至细胞免疫治疗领域，为应对AML抗原异质性提供了新的技术思路。

CAR-T（Chimeric Antigen Receptor T-cell，嵌合抗原受体T细胞）是一种通过基因工程改造T细胞，使其获得特异性识别并杀伤肿瘤细胞能力的免疫治疗技术。MyeloNova团队构建的CAR结构由胞外抗原结合结构域（single-chain variable fragment，scFv）、铰链区、跨膜结构域和胞内激活信号结构域组成。其中，Two-in-one双特异性scFv是整个CAR分子的核心识别模块，它能够利用同一抗原结合区域同时识别LILRB3和LILRB4两个髓系白血病相关靶点。当工程化T细胞遇到表达LILRB3或LILRB4的AML细胞时，即被激活并释放细胞毒性分子，从而实现对肿瘤细胞的杀伤。

在技术开发过程中，项目组首先针对不同结构形式的LILRB3/LILRB4双特异性scFv进行筛选和优化，通过调整抗体可变区的组合方式及连接肽设计，最终获得了具备良好双靶点识别能力的候选scFv。随后，团队利用细胞结合实验和表面等离子共振（Surface Plasmon Resonance，SPR）技术，对其抗原结合能力和特异性进行了系统评价。结果表明，筛选出的双特异性scFv能够同时识别LILRB3和LILRB4，且展现出优异的双靶点结合特征，为后续CAR-T的构建奠定了坚实基础。

在此基础上，MyeloNova团队采用慢病毒转导技术制备LILRB3/LILRB4双特异性CAR-T细胞，并通过流式细胞术检测CAR分子的表达情况。结果显示，工程化CAR-T细胞能够高效表达靶向LILRB3/LILRB4的CAR结构，同时保持正常的T细胞表型，为后续功能验证提供了可靠保障。

在体外抗肿瘤功能评价中，LILRB3/LILRB4 CAR-T细胞展现出明显的抗原依赖性杀伤活性。项目组将THP-1、MV4-11、MOLM-13等多种AML细胞系与CAR-T细胞共培养，结果表明该双特异性CAR-T能够有效识别并杀伤不同类型的AML细胞；在患者来源的原代AML样本中，该CAR-T同样保持了良好的抗肿瘤效果，显示出覆盖不同AML细胞来源的广泛适用潜力。

通过将Two-in-one双特异性抗体识别模块与CAR-T细胞免疫治疗相结合，伦敦玛丽女王学院MyeloNova团队实现了对LILRB3/LILRB4两个髓系白血病相关靶点的同步识别，并完成抗体识别模块筛选、CAR-T细胞构建、体外抗肿瘤功能验证、安全性评价及动物模型验证。这一技术路线为克服AML抗原异质性、降低单一抗原缺失导致的免疫逃逸风险以及提升精准免疫治疗覆盖能力提供了新的技术路径。在后续研究中，团队将进一步评价该双特异性CAR-T应对抗原异质性的能力，并系统开展安全性评估与体内药效验证，推动这一技术路线向临床转化迈进。